FS? Mix Direct for Blood

Cat. #：P2071a，P2072a

產品簡介

FS??Mix Direct for Blood是適合(he)(he)全血模板(ban)擴(kuo)增(zeng)(zeng)的2×濃縮快(kuai)速高效(xiao)PCR預混(hun)合(he)(he)溶液(ye)，含有(you)FS??Taq DNA聚合(he)(he)酶、dNTP混(hun)合(he)(he)物(wu)(wu)、緩沖液(ye)等(deng)PCR擴(kuo)增(zeng)(zeng)必(bi)需(xu)組(zu)分（模板(ban)與(yu)引(yin)物(wu)(wu)除外）。使用時(shi)，僅需(xu)在擴(kuo)增(zeng)(zeng)體(ti)系(xi)中加(jia)入(ru)模板(ban)和引(yin)物(wu)(wu)即可進行(xing)PCR，從而可以極大(da)地簡化操作過(guo)程，縮短(duan)操作時(shi)間，降(jiang)低污染（加(jia)樣次數(shu)減少）。FS??Mix Direct for Blood的反應(ying)體(ti)系(xi)經過(guo)優化處理，高靈(ling)敏度的FS??Taq DNA聚合(he)(he)酶確保處理液(ye)中的微量樣本得到高效(xiao)擴(kuo)增(zeng)(zeng)。本產品不用進行(xing)繁(fan)瑣的DNA提取(qu)，最大(da)限度減少實驗誤差(cha)和交叉污染；同(tong)(tong)時(shi)依靠特殊的緩沖體(ti)系(xi)增(zeng)(zeng)強(qiang)PCR擴(kuo)增(zeng)(zeng)的特異性(xing)，保證擴(kuo)增(zeng)(zeng)效(xiao)果(guo)與(yu)DNA模板(ban)擴(kuo)增(zeng)(zeng)效(xiao)果(guo)同(tong)(tong)樣可靠。

FS??Taq DNA聚(ju)(ju)合酶(mei)是根(gen)據蛋白工程原理，以(yi)(yi)Taq DNA聚(ju)(ju)合酶(mei)為(wei)基(ji)(ji)礎(chu)，研(yan)發設計的(de)新一(yi)(yi)代DNA聚(ju)(ju)合酶(mei)。本(ben)產品具(ju)有類似KOD酶(mei)的(de)快速(su)擴(kuo)增能力，延(yan)伸速(su)度(du)為(wei)20s/kb（70~75℃，簡單模板(ban)可達5s/kb）。是普通Taq DNA聚(ju)(ju)合酶(mei)的(de)3倍，可縮短一(yi)(yi)半(ban)以(yi)(yi)上的(de)擴(kuo)增時間；同時具(ju)備Taq DNA聚(ju)(ju)合酶(mei)擴(kuo)增效率高(gao)、適(shi)應(ying)性(xing)廣等優點。FS??Taq DNA聚(ju)(ju)合酶(mei)使(shi)用(yong)方法(fa)與普通Taq DNA聚(ju)(ju)合酶(mei)基(ji)(ji)本(ben)相同，只(zhi)需注(zhu)意(yi)適(shi)當縮短延(yan)伸時間。該酶(mei)具(ju)有5'→3'聚(ju)(ju)合酶(mei)活性(xing)，無(wu)3'→5'外(wai)切酶(mei)活性(xing)。擴(kuo)增產物具(ju)有3'-dA突出端，可直接用(yong)于TA克隆。

產品組成

本產品(pin)分體系(xi)中(zhong)包(bao)含溴酚(fen)(fen)藍(lan)、不含溴酚(fen)(fen)藍(lan)兩類。體系(xi)中(zhong)包(bao)含溴酚(fen)(fen)藍(lan)的(de)產品(pin)，PCR擴增產物可(ke)直接(jie)電泳檢(jian)測(ce)。這兩類產品(pin)的(de)擴增性能無差異。如無特別說明提供體系(xi)中(zhong)包(bao)含溴酚(fen)(fen)藍(lan)的(de)包(bao)裝。

保存條件

-20℃保存2年。

質量控制

純度檢測：經質量檢測，產品不含脫氧(yang)核糖核酸內切(qie)酶、脫氧(yang)核糖核酸外切(qie)酶和核糖核酸酶污染(ran)。

功能(neng)檢測：PCR方法檢測無宿主殘余DNA，能(neng)有效(xiao)擴增人基(ji)因(yin)組中(zhong)的單拷貝基(ji)因(yin)。

應用舉例

1.?配制反應體系

請于冰上配置反應體系，體系大小與組分用量與添加順序可調整：

[1]?引(yin)物終濃(nong)度建議范圍(wei)：0.1-1 μM。特異性差時(shi)可降低濃(nong)度，效率低時(shi)可提高濃(nong)度。

[2]?可(ke)單獨訂購超純(chun)水(shui)（Cat. #：P9021/P9022/P9023）。

[3]?可單獨訂購25mM MgCl₂（Cat. #：P9031）和PCR Enhancer（Cat. #：P9041）。

2.?設定反應程序進行PCR反應

大多數(shu)模板的快速(su)擴增條件：

[1]?退火溫度應(ying)根(gen)據(ju)Tm值(zhi)較低的引物來(lai)設(she)。

[2]?延伸時間按20 sec/kb來設(she)最佳。

1kb簡單模板的快(kuai)速擴增條件：

由于1kb簡單模板的二級(ji)結構(gou)簡單，且長度較短(duan)，可同時縮短(duan)變性(xing)、退火時間至15s，以實現快速擴增。

3.?分析結果

反應產物可直接進行瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像設備觀察目的條帶的擴增情況。如有需要，可進行割膠回收。無產物或產物量少的改進措施有：1調整退火溫度；2減少抑制劑的影響，如提取的基因組DNA中含有抑制擴增的成分，需要高倍稀釋（1: 10000）后使用；3采用乙醇沉降洗脫，提高模板DNA的純度；4使用PCR添加劑，如PCR Enhancer（Cat. #：P9041）、MgCl₂（Cat. #：P9031）等(deng)可提高產量。

操作注意事項

室溫下FS??Taq DNA聚合酶有一(yi)定(ding)的活性，為避免發(fa)生(sheng)非特異性擴增，請于(yu)冰上配置(zhi)反應(ying)體系，并且最后添加模板DNA。

本(ben)產品可直接從新鮮(xian)或(huo)凍(dong)存(cun)的全血(xue)、抗凝(ning)全血(xue)（EDTA或(huo)其他抗凝(ning)劑(ji)）、FTA卡等樣(yang)本(ben)擴(kuo)增DNA。可用(yong)于人血(xue)或(huo)其他動物(wu)血(xue)液。

延(yan)伸(shen)時間視片(pian)段長度(du)而定(ding)。一般(ban)情況，≤500bp目的片(pian)段延(yan)伸(shen)15s，500bp-1kb延(yan)伸(shen)20s，＞1kb延(yan)伸(shen)時間按20s/kb計算(suan)。

FS? Taq DNA聚合(he)酶具(ju)有脫氧(yang)核苷酸轉移酶活性，因此(ci)在PCR產物(wu)3’末端(duan)通常會(hui)加(jia)上一個多(duo)余的脫氧(yang)腺嘌(piao)呤核苷，可進行TA克隆。

FS??Mix Direct for Blood也可采用(yong)常規程序擴(kuo)(kuo)增(zeng)，擴(kuo)(kuo)增(zeng)產物(wu)純化后可直(zhi)接用(yong)于測序反應。

為方(fang)便加(jia)樣(yang)(yang)，全血可用PBS稀釋后加(jia)樣(yang)(yang)，模板用量根據樣(yang)(yang)本、實驗要求而定。

引物設計注意事項

引(yin)物(wu)長度一般(ban)在15-30個(ge)堿基之間(jian)；上下游引(yin)物(wu)3’末端避免互補，避免出(chu)現3個(ge)以上重復(fu)的G或(huo)C，或(huo)出(chu)現發夾結(jie)構，否則會產生(sheng)非特異性擴增；GC含量控制(zhi)在40-60%，且(qie)上下游引(yin)物(wu)GC含量盡量接近；Tm值控制(zhi)在55-65℃之間(jian)，且(qie)上下游引(yin)物(wu)Tm值盡量接近，額外附加序列（酶切位點(dian)、修(xiu)飾等）是非模(mo)板匹配序列，不參與(yu)Tm值計算。

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